Zusammenhang zwischen Insektizidresistenzprofilen bei Anopheles gambiae sensu lato und landwirtschaftlichen Praktiken in der Elfenbeinküste

Parasites & Vectors Band 16, Artikelnummer: 270 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Die insektizidbasierte Bekämpfung von Malariaüberträgern wird aufgrund der Entwicklung von Insektizidresistenzen bei Mücken zunehmend untergraben. Insektizidresistenzen können teilweise mit dem Einsatz von Pestiziden in der Landwirtschaft zusammenhängen, während das Ausmaß und die Mechanismen der Resistenz je nach landwirtschaftlicher Praxis unterschiedlich sein können. Ziel der aktuellen Studie war es zu beurteilen, ob sich die phänotypische Insektizidresistenz und die damit verbundenen molekularen Resistenzmechanismen bei Anopheles gambiae sensu lato zwischen landwirtschaftlichen Praktiken unterscheiden.

Wir haben An gesammelt. gambiae sl-Larven an sechs Standorten mit drei verschiedenen landwirtschaftlichen Praktiken, darunter Reis-, Gemüse- und Kakaoanbau. Anschließend setzten wir die heranwachsenden erwachsenen Weibchen diskriminierenden Konzentrationen von Bendiocarb (0,1 %), Deltamethrin (0,05 %), DDT (4 %) und Malathion (5 %) aus, indem wir den standardmäßigen Insektizid-Empfindlichkeitstest der Weltgesundheitsorganisation verwendeten. Um die zugrunde liegenden molekularen Resistenzmechanismen zu untersuchen, verwendeten wir Multiplex-TaqMan-qPCR-Assays. Wir haben die Häufigkeit von Mutationen an der Zielstelle bestimmt, einschließlich Vgsc-L995F/S und Vgsc-N1570Y sowie Ace1-G280S. Darüber hinaus haben wir die Expressionsniveaus von Genen gemessen, die zuvor mit Insektizidresistenz in An in Verbindung gebracht wurden. gambiae sl, einschließlich der Cytochrom P450-abhängigen Monooxygenasen CYP4G16, CYP6M2, CYP6P1, CYP6P3, CYP6P4, CYP6Z1 und CYP9K1 sowie der Glutathion-S-Transferase GSTe2.

Der An. Gambiae sl-Populationen aus allen sechs landwirtschaftlichen Standorten waren resistent gegen Bendiocarb, Deltamethrin und DDT, während die Populationen aus den beiden Gemüseanbaustandorten zusätzlich resistent gegen Malathion waren. Die meisten getesteten Mücken trugen mindestens ein mutiertes Vgsc-L995F-Allel, das mit Pyrethroid- und DDT-Resistenz assoziiert ist. In den Kakaoanbaugebieten beobachteten wir die höchsten 995F-Häufigkeiten (80–87 %), darunter ein Großteil der homozygoten Mutanten und mehrere im gleichzeitigen Auftreten mit der Vgsc-N1570Y-Mutation. Wir entdeckten die Ace1-Mutation am häufigsten in Gemüseanbaugebieten (51–60 %), mit mäßiger Häufigkeit in Reis (20–22 %) und selten in Kakaoanbaugebieten (3–4 %). Im Gegensatz dazu zeigten CYP6M2, CYP6P3, CYP6P4, CYP6Z1 und CYP9K1, die zuvor mit metabolischer Insektizidresistenz in Verbindung gebracht wurden, die höchsten Expressionsniveaus in den Populationen aus Reisanbaugebieten im Vergleich zum anfälligen Kisumu-Referenzstamm.

In unserer Studie beobachteten wir interessante Zusammenhänge zwischen der Art der landwirtschaftlichen Praktiken und bestimmten Insektizidresistenzprofilen beim Malariavektor An. gambiae sl, die durch den Einsatz von Pestiziden zum Schutz von Nutzpflanzen entstehen könnten.

Die Vektorkontrolle ist die Hauptstrategie zur Bekämpfung von Malaria und hat sich in Afrika seit vielen Jahren als erfolgreich erwiesen. Leider werden Vektoren zunehmend resistent gegen Insektizide, die im öffentlichen Gesundheitswesen eingesetzt werden. Dies gefährdet die Wirksamkeit von langlebigen insektiziden Netzen (LLINs) und Indoor Residual Spraying (IRS), die die wichtigsten Instrumente zur Bekämpfung von Malariamücken sind [1]. Die klassischen Wirkstoffe, die für diese Werkzeuge verwendet werden, sind Pyrethroide, Organochlorine, Organophosphate und Carbamate. Allerdings wurden kürzlich auch andere Wirkstoffe umfunktioniert, darunter Neonicotinoide und Pyrrole [2]. In mehreren afrikanischen Ländern südlich der Sahara wurde über Resistenzen gegen häufig verwendete Insektizide bei Malariaüberträgern berichtet [3,4,5,6,7,8,9].

Neben Verhaltensänderungen sind auch verschiedene physiologische Mechanismen an der Insektizidresistenz beteiligt. Die wichtigsten bei afrikanischen Malaria-Überträgern beschriebenen sind die Zielstellenresistenz, die zu Veränderungen der Zielstellen des Insektizids führt und die Bindung des Insektizids verhindert [10]; metabolische Resistenz, gekennzeichnet durch Veränderungen im Enzymsystem von Insekten, die zu einer schnellen Entgiftung oder Sequestrierung von Insektiziden führen [11]; und kutikulärer Widerstand, der die Menge des Insektizids verringert, das in das Insekt eindringt [12].

Mutationen an der Zielstelle im spannungsgesteuerten Natriumkanal (Vgsc) sind mit der Resistenz gegen Pyrethroid und Dichlordiphenyltrichlorethan (DDT) verbunden und werden auch als Mutationen der Knockdown-Resistenz (kdr) bezeichnet [6, 13, 14]. In Anopheles gambiae sensu lato wird kdr überwiegend durch zwei Mutationen an derselben Codonposition Vgsc-L995F/S verliehen [15, 16]. Eine zusätzliche Mutation namens „super kdr“ (Vgsc-N1570Y) tritt gleichzeitig mit dem L995F-Allel auf und erhöht die Resistenz weiter [17]. In Westafrika und insbesondere in der Elfenbeinküste gehört kdr zu den am häufigsten gemeldeten Resistenzmechanismen, wobei das Vgsc-995F-Allel vorherrscht [6, 18, 19, 20]. Eine weitere Punktmutation im Acetylcholinesterase-Gen, die eine Glycin-zu-Serin-Substitution (Ace1-G280S) verursacht und Resistenz gegen Carbamat und Organophosphat verleiht [21], wurde auch bei Culex pipiens quinquefasciatus [22] und An gefunden. Gambiae [23, 24] Mücken aus der Elfenbeinküste. Während die kdr- und Ace1-Zielstellenmutationen an der Insektizidresistenz beteiligt sind, erklären sie allein nicht die bei Mücken beobachteten hochresistenten Phänotypen (25).

Der andere wichtige physiologische Mechanismus der Insektizidresistenz bei Mücken ist die Überexpression von Stoffwechselenzymen, die Insektizide entgiften oder binden [11]. Zur metabolischen Resistenz gehören unter anderem Enzyme aus drei großen Enzymfamilien: die Cytochrom-P450-abhängigen Monooxygenasen (P450s oder CYPs), die Carboxylesterase und die Glutathion-S-Transferasen (GSTs). In Feldmückenpopulationen in Côte d'Ivoire, hauptsächlich aus Reisanbaugebieten, wurde eine Überexpression mehrerer Entgiftungsgene im Zusammenhang mit Insektizidresistenz festgestellt [14, 26, 27, 28]. Im Jahr 2014 haben Edi et al. [27] zeigten, dass einige Gene der CYP6 P450-Familie Pyrethroide und andere Insektizide in Feldmücken aus Tiassalé im Süden der Elfenbeinküste metabolisieren. Die Beteiligung von P450 an der Resistenz von Malariavektoren aus derselben Lokalität wurde in nachfolgenden Studien mithilfe von Synergisten-Bioassays (25), quantitativer Polymerasekettenreaktion (qPCR) und RNA-Sequenzierung (14) wiederholt nachgewiesen.

Obwohl die Insektizidresistenz bei Malariaüberträgern auf den Einsatz von Insektiziden im öffentlichen Gesundheitswesen zurückgeführt wird, deuten immer mehr Studien darauf hin, dass der Einsatz von Pestiziden in der Landwirtschaft auch zur Selektion der Insektizidresistenz bei Mücken beiträgt [1, 18, 29, 30]. Wachsende menschliche Bevölkerungen, insbesondere in Afrika, üben einen zunehmenden Druck auf die landwirtschaftliche Produktivität aus, was zu einem verstärkten Einsatz von Pestiziden führt [31]. Tatsächlich haben sich die Importe von Pestiziden zwischen 2005 und 2015 in der westafrikanischen Region nahezu verdreifacht, insbesondere in den drei größten Pestizidmärkten Côte d'Ivoire, Ghana und Nigeria [32]. Darüber hinaus kann der unkontrollierte und unsachgemäße Einsatz von Agrochemikalien zur Entwicklung einer Insektizidresistenz bei Nichtzielinsekten führen, einschließlich Malariaüberträgern, die sich in landwirtschaftlichen Gebieten vermehren, da die zur Bekämpfung von Pflanzenschädlingen verwendeten Verbindungen häufig dieselben Wirkstoffe und molekularen Ziele haben wie diese im öffentlichen Gesundheitswesen verwendet. [5]. Daher erhöht die landwirtschaftliche Bewässerung das Malariarisiko für umliegende Gemeinden erheblich und erhöht auch die Entwicklung einer Insektizidresistenz durch Pestizide zur Bekämpfung von Pflanzenschädlingen [33,34,35]. Die Kreuzresistenz von Mücken gegen Insektizide des öffentlichen Gesundheitswesens stellt heute ein echtes Hindernis für die aktuellen Vektorkontrollmethoden dar, die vom Global Plan for Insecticide Resistance Management (GPIRM) der Weltgesundheitsorganisation (WHO) übernommen wurden [36]. Diese Methoden basieren hauptsächlich auf IRS und LLINs und erfordern ein besseres Verständnis des Zusammenhangs zwischen landwirtschaftlichen Praktiken und Insektizidresistenz.

Frühere Studien haben über den weit verbreiteten Einsatz von Pestiziden in verschiedenen Arten der Landwirtschaft berichtet und gezeigt, dass die Vektorresistenz gegen Insektizide in der Elfenbeinküste von Standort zu Standort unterschiedlich ist [18]. Obwohl in An. sowohl Zielstellenresistenz als auch Hochregulierung von P450-Genen beschrieben wurden. Gambiae SL im Land wurde der Zusammenhang zwischen verschiedenen landwirtschaftlichen Praktiken und Insektizidresistenz nicht untersucht. Daher wird die Beurteilung des aktuellen Status der Malaria-Vektorresistenz bei verschiedenen landwirtschaftlichen Praktiken zu einer Notwendigkeit, um eine effektivere Planung von Kontrollstrategien basierend auf der Art der Landwirtschaft zu ermöglichen. Hier haben wir die phänotypische Resistenz gegenüber diskriminierenden Konzentrationen von Insektiziden mithilfe des standardmäßigen Insektizid-Empfindlichkeitstests der WHO in An bewertet. Gambiae sl, gesammelt in Reis-, Gemüse- und Kakaoanbaugebieten im Westen der Elfenbeinküste. Wir haben außerdem die Häufigkeit von Zielort-Resistenz-Allelen gemessen und die Expressionsniveaus von Stoffwechselgenen charakterisiert, die zuvor im Land mit Insektizidresistenz in Verbindung gebracht wurden.

Larvensammlungen wurden an sechs Untersuchungsstandorten in der Elfenbeinküste mit drei verschiedenen landwirtschaftlichen Praktiken durchgeführt, darunter Kakao-, Reis- und Gemüseanbau. Für jede Anbauart wurden zwei Standorte in die Studie einbezogen. Die Standorte mit bewässertem Reisanbau befanden sich in Agboville (Breitengrad: 5,935496°, Längengrad: −4,223084°) und Tiassalé (Breitengrad: 5,904263°, Längengrad: −4,826142°) in den Waldgebieten der Elfenbeinküste. Die Gemüsestandorte waren Azaguié (Breitengrad: 5,633333°, Längengrad: –4,083333°) und Dabou (Breitengrad: 5,316667°, Längengrad –4,383333°), ebenfalls in der Waldzone gelegen, während die Kakaostandorte Issia (Breitengrad: 6,487614°, Längengrad: −6,583677°) und Soubré (Breitengrad: 5,786623°, Längengrad: −6,589017°), die durch immergrüne Wälder gekennzeichnet sind (Abb. 1).

Karte der Sammelstellen für Mückenlarven in der Elfenbeinküste. In Agbovile und Tiassalé wurden die Larven auf den Reisfeldern gesammelt, während sie auf den Gemüsefeldern in Azaguié und Dabou gesammelt wurden. Im westlichen Teil wurden Mückenlarven auf den Kakaofeldern von Issia und Soubré gesammelt. Die Karte wurde mit QGIS (2022, QGIS Geographic Information System. QGIS.ORG Association; http://www.qgis.org) erstellt. Basiskartenquelle: Sentinel-2 cloudless (https://s2maps.eu) von EOX IT Services GmbH (enthält modifizierte Copernicus Sentinel-Daten 2020)

Das Klima in den Untersuchungsgebieten ist feucht und äquatorial [37] und durch vier Jahreszeiten gekennzeichnet: (i) eine lange Regenzeit, die von Mai bis Juni starke Regenfälle mit sich bringt; (ii) eine kurze Regenzeit mit Regenfällen von August bis September im südlichen Teil und von August bis Oktober im westlicheren Teil; (iii) eine kurze Trockenzeit von Oktober bis November; und (iv) eine Haupttrockenzeit von Dezember bis April. Die Durchschnittstemperatur schwankt zwischen 21 °C und 33 °C.

Zur Bekämpfung von Dipteren- und Lepidopteren-Insekten, die die Nutzpflanzen schädigen, werden auf den Reisfeldern von Agboville und Tiassalé sowie auf den Gemüsefeldern von Azaguié und Dabou hauptsächlich Pyrethroide und Neonicotinoide eingesetzt [29]. Beide landwirtschaftlichen Praktiken werden in der Elfenbeinküste das ganze Jahr über praktiziert. Issia und Soubré liegen in der größten Kakaoanbauregion der Elfenbeinküste. Der Kakaoanbau ist die wichtigste Wirtschaftsaktivität im westlichen Teil des Landes und eine der wichtigsten Säulen der Wirtschaft der Elfenbeinküste. In Kakaoanbaugebieten werden vor allem Neonikotinoide in Kombination mit Pyrethroiden als Insektizide eingesetzt, um Kakaofelder vor Miridbefall zu schützen, der als das größte Schädlingsproblem im Kakaoanbau gilt [18, 38]. In unseren Untersuchungsgebieten enthalten die in den bewässerten Reis- und Gemüseanbaugebieten verteilten LLINs Deltamethrin, während die im Kakaoanbaugebiet verteilten LLINs Alpha-Cypermethrin enthalten [39].

Wir haben An gesammelt. gambiae sl-Larven in der südlichen Elfenbeinküste (d. h. Agboville, Azaguié, Dabou und Tiassalé) von Juni bis Juli im Jahr 2018 und in der westlichen Côte d'Ivoire (d. h. Issia, Soubré) im Juni 2019. In Agboville und Tiassalé haben wir gesammelt Larven in bewässerten Reisfeldern, während sie in Dabou und Azaguié in Wassergruben auf den Gemüsefeldern gesammelt wurden. In Soubré und Issia sammelten wir in Wasserpfützen auf Kakaofeldern (Abb. 1). Zurück in Abidjan zogen wir die Larven im Insektarium des Centre Suisse de Recherches Scientifiques en Côte d'Ivoire (CSRS) unter Standardbedingungen von 26 ± 2 °C, 75 ± 10 % relativer Luftfeuchtigkeit und 12 °C bis zum Erwachsenenstadium auf h/12 h Hell-/Dunkel-Photoperiode. Die Larven von jedem Standort wurden separat aufgezogen und jeden Morgen mit 0,075 g TetraMin®-Fischfutterpulver (Tetra, Melle, Deutschland) gefüttert. Aufstrebende Erwachsene hatten Zugang zu einer 10 %igen Honiglösung.

Um die phänotypische Anfälligkeit für Insektizide gegenüber den vier klassischen Insektizidklassen zu bestimmen, die üblicherweise im öffentlichen Gesundheitswesen verwendet werden, führten wir den standardmäßigen Insektizid-Anfälligkeitstest der WHO [40] mit 2 bis 5 Tage alten, nicht mit Blut gefütterten erwachsenen weiblichen Mücken durch, die aufgetaucht waren aus den im Feld gesammelten Larven. Wir haben ihre Anfälligkeit gegenüber den von der WHO diskriminierten Konzentrationen von Bendiocarb (0,1 %), Deltamethrin (0,05 %), DDT (4 %) und Malathion (5 %) auf behandelten Filterpapieren der WHO getestet. Um das Knockdown-Verhältnis zu bestimmen, führten wir Bioassays mit Erwachsenen durch, die einem insektizidempfindlichen An entnommen wurden. Gambiae im engeren Sinne. Kisumu-Kolonie und setzte sie Deltamethrin (0,05 %) und DDT (4 %) aus. Für jede Kombination aus Insektizid und Feldstandort haben wir sechs Chargen von 20–25 Weibchen exponiert, darunter vier Chargen, die mit Insektizid imprägnierten Filterpapieren ausgesetzt waren, und zwei Chargen, die als Negativkontrollen dienten und Kontrollpapieren ausgesetzt waren, die nur das Insektizid-Trägeröl enthielten. Während der einstündigen Expositionszeit haben wir in 5-Minuten-Intervallen aufgezeichnet, wie viele Mücken niedergeschlagen wurden. Nach einer Stunde Exposition überführten wir die Mücken zurück in die Halteröhrchen und erlaubten ihnen, sich nach Belieben von 10 %iger Honiglösung zu ernähren, während die verzögerte Sterblichkeit 24 Stunden nach der Exposition aufgezeichnet wurde.

Wir haben die Mücken, die 24 Stunden nach der Exposition noch am Leben waren, in absolutem Ethanol getötet und dann überschüssiges Ethanol mit einem Papiertuch abgetupft. Anschließend überführten wir die Mücken in Gruppen von 10 bis 100 Individuen vorsichtig in 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen, die je nach Anzahl der Mücken 0,7–1,4 ml RNAlater® (Ambion, Inc., Austin, TX, USA) enthielten. Wir haben RNAlater-Röhrchen mit Mücken über Nacht bei 4 °C aufbewahrt, um ein gründliches Eindringen in das Gewebe zu ermöglichen. Am folgenden Tag wurde überschüssiges RNAlater® entfernt und die Röhrchen bis zur weiteren Verarbeitung zur DNA- und RNA-Extraktion bei –20 °C gelagert.

Für die Extraktion der gesamten RNA und DNA wählten wir zufällig 50 mit RNAlater® konservierte Personen aus den Kontrollen aus, die in den Bioassays keinen Insektiziden ausgesetzt waren, und verarbeiteten sie mit dem magnetischen Bead-basierten Kit von MagnaMedics (MagnaMedics GmbH, Aachen, Deutschland). . Wir zermahlen die Mücken einzeln in 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen, indem wir 200 µl TE-Puffer (10 mM Tris(hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid [Tris-HCl], 1 mM Ethylendiamintetraessigsäure [EDTA], pH 8,0) pro Röhrchen hinzufügen und einen Stößel verwenden. angetrieben von einem handgeführten Gewebezerkleinerer. Dann fügten wir 150 µl Lysepuffer hinzu, vermischten alles durch 15-sekündiges Vortexen und inkubierten die Mischung 10 Minuten lang bei Raumtemperatur, während wir die Röhrchen 15 s lang alle 2 Minuten vortexten. Nach der Inkubation haben wir die nicht lysierten Mückenreste durch 2-minütige Zentrifugation bei 16.000 × g zentrifugiert. Als nächstes überführten wir den klaren Überstand in ein neues 1,5-ml-Röhrchen, fügten 20 µl Magnetkügelchen und 440 µl Bindungspuffer hinzu und verwirbelten die Mischung 15 s lang. Wir inkubierten die Mischung erneut 10 Minuten lang bei Raumtemperatur, während wir die Röhrchen dazwischen wie oben für den Lyseschritt beschrieben vortexten. Die Röhrchen wurden 2 Minuten lang auf ein Magnetgestell gestellt, damit die Magnetkügelchen sedimentieren konnten, und dann wurde der Überstand verworfen. Wir haben die restlichen Perlen zweimal gewaschen, indem wir 200 µl Waschpuffer hinzugefügt haben, die Röhrchen gewirbelt haben und die Mischung 1 Minute lang bei Raumtemperatur inkubieren lassen, bevor wir sie für 2 Minuten wieder auf das Magnetgestell gestellt und den Überstand verworfen haben. Abschließend extrahierten wir die Nukleinsäuren durch Zugabe von 180 µl Elutionspuffer, verwirbelten die Röhrchen und inkubierten die Mischung 10 Minuten lang in einem auf 50 °C eingestellten Wasserbad und verwirbelten zwischendurch wie oben beschrieben. Nachdem die Röhrchen aus dem Wasserbad genommen wurden, haben wir sie erneut gevortext, zentrifugiert und die Röhrchen für 2 Minuten auf das Magnetgestell gestellt. Schließlich sammelten wir den Überstand, der nun die gereinigte DNA und RNA enthielt, überführten die Lösung in neue 1,5-ml-Röhrchen und lagerten sie bei –80 °C.

Um die Geschwisterarten der An zu identifizieren. gambiae sl-Komplex führten wir zwei TaqMan®-Multiplex-qPCR-Assays durch [41, 42] mit Modifikationen der ursprünglichen Protokolle, wie in Wipf et al. beschrieben. [14]. Kurz gesagt, der erste Test unterscheidet Anopheles coluzzii und An. gambiae ss als Gruppe (Ag+) aus Anopheles bwambae, Anopheles melas, Anopheles merus und Anopheles quadriannulatus (Aq+) und aus Anopheles arabiensis (Aa+). Der zweite Test unterscheidet zwischen An. coluzzii (ehemalige molekulare M-Form) und An. gambiae ss (ehemalige molekulare S-Form) basierend auf dem SINE 200 X6.1-Locus, der in An fixiert ist. coluzzii und fehlt in An. gambiae ss Wir haben die von Santolamazza et al. entwickelten gängigen Primer verwendet. [42] und die in Wipf et al. beschriebenen Sonden. [14]. Wir führten den zweiten Test mit der DNA der Proben durch, die sich im ersten Test als Ag+ herausstellten.

Zusätzlich zu den Artenidentifizierungsassays verwendeten wir diagnostische TaqMan® qPCR-Assays, um die kdr-Mutationen der Zielstelle des spannungsgesteuerten Natriumkanals (d. h. Vgsc-L995F/S und Vgsc-N1570Y) und die Acetylcholinesterase-Mutation Ace1-G280S zu erkennen. nach dem Protokoll von Bass et al. [43] mit den in Mavridis et al. beschriebenen Anpassungen. [44].

Zusätzlich zu den diagnostischen qPCRs zur Artenidentifizierung und zum Nachweis von Mutationen an der Zielstelle haben wir die Expressionsniveaus von Genen gemessen, die zuvor mit Insektizidresistenz in An in Verbindung gebracht wurden. gambiae sl, einschließlich der Cytochrom P450-abhängigen Monooxygenasen CYP4G16, CYP6M2, CYP6P1, CYP6P3, CYP6P4, CYP6Z1 und CYP9K1 sowie der Glutathion-S-Transferase GSTe2. Als Referenz für die gesamte Genexpression haben wir zusätzlich die Expressionsniveaus des Housekeeping-Gens gemessen, das für das ribosomale Protein S7 (RPS7) kodiert. Auch hier verwendeten wir eine Reihe von Messenger-RNA (mRNA)-spezifischen TaqMan®-Reverse-Transkriptions-qPCRs (RT-qPCRs), die von Mavridis et al. entwickelt wurden. [45]. Anstatt RNA oder DNA zu bündeln, haben wir die Genexpressionsniveaus für jedes Individuum separat gemessen, mit 50 Individuen pro Feldstandort und 50 Individuen aus dem insektizidempfindlichen An. Gambiae SS Kisumu-Kolonie. Dieser anfällige Stamm aus Kenia wird als Kontrolle für Insektizid-Empfindlichkeits-Bioassays im Insektengehege gehalten.

Wir führten die qPCR-Reaktionen in Volumina von 10 µl durch, die 1 µl Template-Nukleinsäureextrakt und 9 µl Mastermix aus Primern und Sonden in den zuvor veröffentlichten Endkonzentrationen enthielten [14]. Die Mastermix-Reagenzien wurden von Fast-Track Diagnostics (FTD, Esch-sur-Alzette, Luxemburg) geliefert. Alle Reaktionen wurden auf einem C1000 Touch/CFX96™ Real-Time PCR System (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) in 96-Well-Platten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland; Katalognummer: 72.1980.202) durchgeführt. Die thermischen Zyklusparameter waren 15 Minuten für die reverse Transkription bei 50 °C, RTase-Inaktivierung und anfängliche Denaturierung bei 95 °C für 3 Minuten, gefolgt von 40 Denaturierungszyklen bei 95 °C für 3 Sekunden und Annealing-/Verlängerungsschritten bei 60 °C C für 30 s.

Für den Insektizid-Empfindlichkeitstest haben wir sowohl den sofortigen Knockdown in 5-Minuten-Intervallen bis zu 1 Stunde als auch die verzögerten Sterblichkeitsraten 24 Stunden nach der Exposition bewertet. Zur Visualisierung der Pyrethroid- und DDT-Knockdown-Zeit wurde eine Überlebensanalyse durchgeführt, wobei der Knockdown-Effekt auf die Feldmückenpopulationen mit dem Effekt auf die insektizidempfindliche Kisumu-Kolonie verglichen wurde. Für die Interpretation der Sterblichkeitsraten im Hinblick auf den phänotypischen Resistenzstatus folgten wir den WHO-Kriterien [40]: Eine Sterblichkeitsrate unter 90 % deutet auf eine Resistenz hin; eine Sterblichkeitsrate von 98 % oder mehr weist auf eine Anfälligkeit hin; und eine Sterblichkeitsrate zwischen 90 und 97 % deutet auf eine mögliche Resistenz hin, die bestätigt werden muss.

[ 46]. Um zu beurteilen, ob sich die Genexpressionsniveaus zwischen Mückenpopulationen unterscheiden, führten wir für jedes Gen ein lineares Regressionsmodell mit 2−ΔCT als abhängiger Variable durch. Als Referenz verwendeten wir den anfälligen Kisumu-Stamm. Wir haben das Signifikanzniveau auf α = 0,05 festgelegt und die P-Werte für Mehrfachtests mithilfe der Bonferroni-Anpassungsmethode angepasst [47].

Wir haben die gesamte Datenanalyse in R Version 4.0.3 [48] mit RStudio Version 1.3.1093 [49] durchgeführt. Wir haben das R-Paket „tidyverse“ zum Aufräumen und Visualisieren von Daten verwendet [50]. Die R-Pakete „survival“ und „survminer“ [51] wurden verwendet, um die Überlebenskurven darzustellen und die Kaplan-Meier-Schätzungen zu berechnen [52].

Die Knockdown-Raten für DDT und Deltamethrin variierten erheblich zwischen den Standorten (DDT: P-Wert < 0,001; Deltamethrin: P-Wert < 0,0001), waren jedoch in allen Feldpopulationen wesentlich niedriger im Vergleich zur insektizidempfindlichen Kisumu-Kolonie (P-Wert). < 0,0001) (Abb. 2), was die in den verzögerten 24-Stunden-Sterblichkeitsraten beobachtete Insektizidresistenz bestätigt (Abb. 3). Die Exposition gegenüber Deltamethrin tötete Mücken aller getesteten Feld- und Laborpopulationen schneller als DDT (Abb. 2). Unter den Feldpopulationen zeigte die Population des Gemüseanbaugebiets Dabou die schnellste und höchste Knockdown-Rate sowohl mit Deltamethrin als auch mit DDT, obwohl die Endpunkt-Knockdown-Raten 1 Stunde nach der Exposition 25 % bzw. 12 % nicht überstiegen. Die niedrigste Knockdown-Rate mit Deltamethrin wurde bei der Issia-Kakaofeldpopulation beobachtet. Im Gegensatz dazu wurden die meisten Kisumu-Mücken bereits nach 10-minütiger Deltamethrin-Exposition niedergeschlagen und alle nach 40-minütiger Exposition (Abb. 2). Die Knockdown-Wahrscheinlichkeit mit DDT war bei Soubré-Kakaofeldpopulationen am niedrigsten (0 %) und bei Dabou-Gemüsefeldpopulationen am höchsten (12 %) (P-Wert < 0,0001) (Abb. 2). Im Vergleich dazu wurde die Hälfte der anfälligen Kisumu-Mücken durch DDT nach 25 Minuten und alle nach 50 Minuten Einwirkungszeit niedergeschlagen (Abb. 2).

Kaplan-Meier-Überlebenskurven zeigen den kumulativen Abbau über die 60-minütige Exposition gegenüber diagnostischen Konzentrationen von Deltamethrin (0,05 %) und DDT (4 %) im Insektizid-Empfindlichkeitstest der WHO. Der für den Kaplan-Meier-Test verwendete Log-Rank-Test ergab P-Werte < 0,0001 zwischen Kisumu und den Reis-, Gemüse- und Kakaostandorten

24-Stunden-Mortalitätsraten gegenüber den diagnostischen Konzentrationen Bendiocarb (0,1 %), DDT (4 %), Deltamethrin (0,05 %) und Malathion (5 %). Sterblichkeitsraten über 98 % (rote Linie) weisen auf eine Anfälligkeit gemäß den WHO-Kriterien für phänotypische Resistenz hin. Fehlerbalken geben 95 %-Konfidenzintervalle an

Alle Mückenpopulationen aus den drei landwirtschaftlichen Betrieben waren resistent gegen Deltamethrin, DDT und Bendiocarb. Allerdings waren die Populationen der Reis- und Kakaostandorte immer noch anfällig für Malathion (Abb. 3). Die Kisumu-Referenzkolonie war vollständig anfällig für DDT und Deltamethrin. Die 24-Stunden-Mortalitätsraten in den nicht-exponierten Kontrollgruppen lagen in jedem Bioassay unter 5 %, sodass wir die Kontrollmortalitäten nicht korrigierten.

An allen Standorten bestätigten die qPCR-Tests das Vorhandensein beider An. Gambiae SS und An. coluzzii mit einer 96%igen Dominanz von An. coluzzii (n = 295). Alle Mücken aus den Reisfeldern von Agboville und Tiassalé sowie die aus den Gemüsefarmen von Azaguié und Dabou wurden als An identifiziert. coluzzii, bis auf einen An. coluzzii/An. Gambiae SS-Hybride aus Azaguié. Während An. coluzzii war die vorherrschende Art in den Kakaoplantagen von Issia und Soubré, wir identifizierten 12 % bzw. 10 % der Exemplare als An. Gambiae SS bzw.

Wir identifizierten mehrere Mutationen am Zielort, darunter die kdr-Loci Vgsc-L995F und Vgsc-N1570Y und die Acetylcholinesterase-Mutation Ace1-G280S, während die Allelhäufigkeit je nach Standort und landwirtschaftlicher Praxis variierte (Abb. 4). Im Gegensatz dazu konnten wir das mutierte Vgsc-L995S-Allel nicht nachweisen. Die Mutation Vgsc-L995F, die mit Pyrethroid- und DDT-Resistenz assoziiert ist, war an allen Standorten das häufigste Allel (Abb. 4). In den Kakaoanbaugebieten Issia und Soubré konnten wir hohe Vgsc-L995F-Allelhäufigkeiten feststellen, wohingegen wir in den Gemüse- und Reisgebieten mäßige Häufigkeiten fanden. Die Vgsc-N1570Y-Mutation war in Azaguié, Issia, Soubré und Tiassalé in geringer Häufigkeit vorhanden und wurde in Agboville und Dabou nicht entdeckt (Abb. 4). Die höchsten Häufigkeiten wurden in beiden Kakaoanbaugebieten gefunden.

Allelhäufigkeit der Zielstellen-Resistenzmutationen Vgsc-L995F, Vgsc-N1570Y und Ace1-G280S. Die Prozentsätze geben die Häufigkeit der Resistenzallele an, während die Balken die tatsächlichen Zahlen anzeigen

Wir fanden die mit Carbamat- und Organophosphatresistenz assoziierte Ace1-G280S-Mutation bei den höchsten Allelhäufigkeiten sowohl in den Gemüseanbaugebieten Dabou (60 %) als auch Azaguié (51 %), hauptsächlich jedoch in Dabou, während sie im Reis unter 25 % lag Feldpopulationen von Agboville und Tiassalé und unter 5 % in den Kakaofeldern von Issia und Soubré (Abb. 4).

Die Cytochrom P450-abhängigen Monooxygenasen CYP4G16, CYP6M2, CYP6P1, CYP6P3, CYP6P4, CYP6Z1 und CYP9K1 waren im Vergleich zu Kisumu deutlich überexprimiert, wobei es zwischen den verschiedenen landwirtschaftlichen Standorten Unterschiede gab (Abb. 5 und 6). Kakaoanbaustandorte zeigten insgesamt niedrige Expressionsniveaus, während Reisanbaustandorte erhöhte Expressionsniveaus aufwiesen und Gemüseanbaustandorte ein gemischtes Bild zeigten (Abb. 6). Die drei P450-Moleküle CYP9K1, CYP6Z1 und CYP6M2 waren an allen sechs Feldstandorten deutlich überexprimiert, während sie am deutlichsten in den Reisanbaustandorten Agboville und Tiassalé, gefolgt vom Gemüsestandort Dabou, überexprimiert waren (Abb. 6). Die höchsten Faltungsänderungen wurden für CYP9K1 in Agboville (5,3-fach erhöht) und Dabou (5,2-fach erhöht) festgestellt. Während CYP4G16 in Dabou hochreguliert war, wurde interessanterweise das gleiche Gen im anderen Gemüseanbaugebiet Azaguié und im Kakaoanbaugebiet Issia nicht signifikant unterschiedlich exprimiert.

Genexpressionsniveaus von Entgiftungsenzymen in Anopheles gambiae sl aus den sechs Feldpopulationen mit drei verschiedenen landwirtschaftlichen Praktiken und im anfälligen Kisumu-Stamm. Die Kästchen geben die 25–75 %-Quartile an. Die Whiskers zeigen den Bereich von 5–95 % und die Punkte stellen Ausreißer dar

Differenzielle Expressionsniveaus für gemessene mutmaßliche Entgiftungsgene in Feldpopulationen. Die Faltungsänderungen geben die Änderung des Expressionsniveaus einer Population gegenüber dem anfälligen Referenzstamm Kisumu auf der log2-Skala an. Die Faltungsänderungen wurden mithilfe verallgemeinerter linearer Regressionsmodelle für jedes Gen geschätzt. ns nicht signifikant; * P < 0,05; ** P < 0,01; *** P < 0,001

Unabhängig von der vorherrschenden landwirtschaftlichen Praxis ist An. Gambiae sl-Populationen aus allen sechs ivorischen Standorten waren resistent gegen Deltamethrin, DDT und Bendiocarb, wohingegen nur Populationen aus Gemüseanbaugebieten zusätzlich resistent gegen Malathion waren. Während kdr-Mutationen, die die Pyrethroid- und Organochlor-Zielstelle verändern, als treibender Insektizidresistenzmechanismus in Kakaostandorten auftraten, identifizierten wir in den bewässerten Reisstandorten hohe Expressionsniveaus von insektizidmetabolisierenden P450-Enzymen. An den beiden Gemüsestellen fanden wir sowohl kdr- als auch Ace1-Zielstellenmutationen, die mit phänotypischer Resistenz assoziiert sind, die Stellen zeigten jedoch gegensätzliche Expressionsmuster metabolischer Gene.

In Côte d'Ivoire – wie auch in anderen afrikanischen Ländern – wurde vermutet, dass der Einsatz von Pestiziden in der Landwirtschaft eine der Ursachen ist, die indirekt mit der Insektizidresistenz bei Malariaüberträgern zusammenhängen, obwohl sich nur wenige Studien auf den Zusammenhang zwischen Landwirtschaft und Insektizidresistenz konzentriert haben [29, 30, 53, 54]. Die meisten früheren in Côte d'Ivoire durchgeführten Studien haben einen sehr starken Trend zur Resistenz gegen Pyrethroide und DDT gezeigt und auch die Resistenz gegen Carbamate und Organophosphate nimmt zunehmend zu [27, 28, 55]. In einer Überwachungsstudie wurde festgestellt, dass Pyrethroide unter den in Gemüse-, Reis- und Kakaofeldern verwendeten Insektiziden vorherrschen, während Vektoren aus diesen landwirtschaftlichen Praktiken Resistenzen gegen DDT, Deltamethrin und Bendiocarb zeigten [18]. Im Jahr 2016 haben Chouaïbou et al. [29] entdeckten eine Malathionresistenz bei Malariavektoren, die auf Gemüsefeldern in Dabou gesammelt wurden, und stellten fest, dass Organophosphate 9 % der an diesem Standort verwendeten Insektizide ausmachten, verglichen mit nur 2 % auf den Reisfeldern von Tiassalé, wo Mücken wie in anfällig für Malathion waren unsere Studie. Daher können landwirtschaftliche Pestizide in Mückenbruthabitaten die Selektion von Insektizidresistenzen in An begünstigen. gambiae sl-Mücken gegen Verbindungen, die bei Interventionen zur Vektorkontrolle nicht verwendet wurden.

Bei der Suche nach den Mechanismen, die die beobachtete phänotypische Resistenz verursachen, fanden wir eine sehr hohe Allelhäufigkeit der Vgsc-L995F-Mutation im Zusammenhang mit Pyrethroid- und DDT-Resistenz in Kakaogebieten. Da Côte d'Ivoire tatsächlich der größte Kakaoproduzent der Welt ist, ist sein westlicher Teil dabei, sich zur neuen Zone mit hoher Kakaoproduktion des Landes zu entwickeln [37]. Daher werden im Kakaoanbau intensiv Pestizide wie Pyrethroide eingesetzt, um sie vor Pflanzenschädlingen zu schützen [38]. Diese Aktivitäten und der Einsatz von mit Alpha-Cypermethrin behandelten Netzen während der Interventionen des nationalen Malariakontrollprogramms in dieser Region (39) übten wahrscheinlich einen enormen Selektionsdruck aus, der zur Entwicklung einer Pyrethroidresistenz bei den Vektoren führte. Darüber hinaus haben wir mit mäßiger Häufigkeit das Vorhandensein des Vgsc-1570Y-Allels festgestellt, das die Auswirkungen der Vgsc-L995F-Mutation verstärkt. Unseres Wissens ist dies das erste Mal, dass die Vgsc-N1570Y-Mutation in den Kakaofeldern Issia und Soubré nachgewiesen wurde. Die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass die in der Kakaoregion beobachtete phänotypische Resistenz wahrscheinlich mit der hohen Häufigkeit der Mutationen Vgsc-L995F und Vgsc-N1570Y zusammenhängt, was wahrscheinlich die entscheidende Rolle der kdr-Mutation bei der Verleihung von Pyrethroid- und DDT-Resistenz bestätigt.

Wir haben in An eine Resistenz gegen Carbamat- und Organophosphat-Insektizide beobachtet. Gambiae SL-Populationen aus Gemüsefeldern von Dabou und Azaguié. Dies kann ein Hinweis auf den intensiven Einsatz von Carbamat und Organophosphat sein, die die Brutstätten von Mücken in der Kulturumgebung verschmutzen können. Diese Hypothese wird durch die Studie von Chouaïbou et al. gestützt. [29], die Carbamat- und Organophosphatrückstände in Mückenbrutstätten und im Boden von Dabou-Gemüsefeldern sowie phänotypische Resistenz bei An fanden. Gambiae sl zu Bendiocarb und Malathion. Beruhigenderweise fanden wir die höchsten Häufigkeiten des unempfindlichen Acetylcholinesterase-Gens Ace1-G280S bei Mücken aus Gemüseanbaugebieten, was die beobachtete Kreuzresistenz zwischen Carbamat- und Organophosphat-Insektiziden bestätigt. Im Jahr 2016 haben Chouaïbou et al. [29] stellten eine Malathionresistenz bei Malariavektoren fest, die auf Gemüsefeldern in Dabou gesammelt wurden, und stellten fest, dass Organophosphate 9 % der an diesem Standort verwendeten Insektizide ausmachten, verglichen mit nur 2 % auf den Reisfeldern von Tiassalé, wo Mücken wie bei uns anfällig für Malathion waren Studie. Daher stellt das Vorhandensein einer Ace1-Mutation, die eine Kreuzresistenz gegen diese Insektizide verleiht, eine wichtige Bedrohung für Vektorkontrollstrategien auf Carbamat- und Organophosphatbasis dar. Der Einsatz neu entwickelter Insektizide mit unterschiedlichen Wirkmechanismen und deren Kombination mit älteren Klassen in groß angelegten Interventionen ist zur Bekämpfung der Insektizidresistenz dringend erforderlich.

Schließlich ergab die Genexpressionsanalyse, dass mehrere P450 in Reisfeldern im Vergleich zu Kisumu überexprimiert waren. Wir fanden heraus, dass die P450-Gene CYP9K1, CYP6M2, CYP6Z1, CYP6P4 und CYP6P3 unter den in Reisanbaugebieten und Gemüseanbaugebieten nachgewiesenen Genen am stärksten hochreguliert waren. Tatsächlich könnte eine häufige Exposition der Larven gegenüber landwirtschaftlichen Schadstoffen und verschiedenen Xenobiotika im Wasser von Reis- und Gemüsefeldern zu metabolischem Stress führen, der zu einer Insektizidentgiftung im Insekt führt. Neuere Studien haben gezeigt, dass eine wiederholte Exposition gegenüber An. gambiae sl und Aedes aegypti-Larven gegenüber Agrochemikalien führten zu einer signifikanten Toleranz gegenüber Insektiziden aufgrund der Stimulierung mehrerer Gene, die für die Zielortresistenz und die Stoffwechselresistenz verantwortlich sind, einschließlich P450-Genen (56, 57). Daher könnten die Praxis des Reisanbaus und des Gemüseanbaus mehrmals im Jahr und der intensive Einsatz von Insektiziden in diesen Kulturen sowie die in den Wassergruben der Kulturpflanzen vorhandenen Xenobiotika, die die metabolische Genexpression begünstigen, der Grund dafür sein, dass P450-Mechanismen stärker selektiert werden Reisanbaustandorte und im Gemüseanbaustandort Dabou als die Kakaoanbaustandorte. Die Überexpression mehrerer P450, die sowohl in den Reisanbaugebieten als auch in den Gemüseanbaugebieten von Dabou festgestellt wurde, sowie die Mutationen an der Zielstelle könnten die beobachteten niedrigen Sterblichkeitsraten bei DDT, Deltamethrin und Bendiocarb erklären. Wir fanden heraus, dass CYP6M2 an allen Stellen hochreguliert war, das Gen jedoch in Tiassalé im Vergleich zu Kisumu überwiegend überexprimiert war. Tatsächlich erwiesen sich Tiassalé-Feldmücken als resistent gegen Deltamethrin, wohingegen sie trotz des Vorhandenseins von Ace1-Mutationen immer noch anfällig für Malathion waren, was ein Hinweis auf eine negative Kreuzresistenz sein könnte, wie in Wipf et al. diskutiert. [14]. Der Nachweis, dass P450-Enzyme (CYP6M2) eine negative Kreuzresistenz verleihen können, wurde auch direkt in einer In-vivo-Studie mit afrikanischen Malariavektoren von Adolfi et al. erbracht. [58]. Eine solche erhöhte Anfälligkeit für Malathion kann sich positiv auf das Management von Insektizidresistenzen auswirken – insbesondere im Hinblick auf die Verbesserung der Instrumente zur Bekämpfung von Malariavektoren [59].

Obwohl wir einige Zusammenhänge zwischen Insektizidresistenzmechanismen und landwirtschaftlicher Praxis beobachteten, erkennen wir an, dass mehrere andere Faktoren das untersuchte Ergebnis beeinflusst haben könnten. Ein großer Vorbehalt besteht darin, dass die meisten unserer Feldstandorte mit demselben landwirtschaftlichen Typ geografisch näher beieinander lagen als solche mit einem anderen Typ. Darüber hinaus wurden die Larvensammlungen in den Kakaoanbaugebieten ein Jahr später durchgeführt als in den Reis- und Gemüseanbaugebieten. Beide oben genannten Einschränkungen könnten dazu geführt haben, dass ähnliche Umweltfaktoren – zusätzlich zu denen aus der Landwirtschaft – die Resistenzselektion bei Malariaüberträgern beeinflussen. Beispielsweise wurden die in den verschiedenen geografischen Gebieten verbreiteten LLINs mit unterschiedlichen Pyrethroid-Insektiziden behandelt [60]. Zukünftige Studien würden von der Messung der Stärke der Resistenz gegen verschiedene Insektizide mithilfe von Intensitäts- oder Dosis-Wirkungs-Bioassays und unter Einbeziehung der von der WHO präqualifizierten neuen Insektizide Broflanilid, Chlorfenapyr und Clothianidin sehr profitieren [61].

Obwohl neuere Studien eine Überexpression von Entgiftungsgenen in einigen unserer Untersuchungsstandorte gezeigt haben, vor allem aber in gepoolten Mückenproben, ging diese Studie noch einen Schritt weiter, indem sie die Genexpressionsniveaus jedes Individuums separat maß, was unsere Ergebnisse untermauerte und entomologische Basisdaten für Reis lieferte. , Gemüse- und Kakaoanbaugebiete.

Die in allen Anbaugebieten beobachtete Insektizidresistenz würde ein Hindernis für die verschiedenen Bekämpfungsstrategien darstellen, die im Wesentlichen auf LLINs und IRS basieren, wenn nichts unternommen wird, um die aktuelle Situation zu ändern. Die Beteiligung anderer Umweltfaktoren wie bestimmter Schadstoffe und Abfälle aus Industriebetrieben rund um Anbauflächen muss gründlich untersucht werden, um festzustellen, ob diese Faktoren zum Selektionsdruck des Stoffwechsels und des Zielort-Resistenzmechanismus bei Malariaüberträgern rund um landwirtschaftliche Betriebe beitragen. Zusammenfassend zeigte die vorliegende Studie interessante Zusammenhänge zwischen der landwirtschaftlichen Praxis und der Art der Resistenzmechanismen bei Malaria-Überträgern auf, die einer weiteren Untersuchung bedürfen. Daher wird vorgeschlagen, dass nationale Malariakontrollprogramme enger mit dem Agrarsektor zusammenarbeiten, um gemeinsam integrierte Risikomanagement- und Vektorkontrollstrategien unter Einbeziehung der Landwirte zu entwickeln.

Alle relevanten Daten sind im Papier enthalten. Rohdaten sind auf begründete Anfrage beim entsprechenden Autor erhältlich.

Acetylcholinesterase

Anopheles gambiae

Anopheles gambiae im weiteren Sinne

Anopheles gambiae im engeren Sinne

Schweizerisches Zentrum für wissenschaftliche Forschung in der Elfenbeinküste

Schwellenzyklus

Dichlordiphenyltrichlorethan

Ethylendiamintetraessigsäure

Globaler Plan für das Management von Insektizidresistenzen

Glutathion-S-Transferase

Restsprühen im Innenbereich

Knockdown-Widerstand

Langlebige insektizide Netze

Cytochrom P450-abhängige Monooxygenasen

Quantitative (oder Echtzeit-)Polymerasekettenreaktion mit umgekehrter Transkription

Tris(hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid

Spannungsgesteuerter Natriumkanal

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Referenzen herunterladen

Wir danken allen Landwirten von Agboville, Tiassalé, Azaguié, Dabou, Issia und Soubré, die uns die Erlaubnis erteilt haben, Larven auf ihren Feldern zu sammeln. Wir danken Laura Vavassori vom Swiss TPH und Zoh Marius von CSRS für die relevante Kritik an der ersten Version des Manuskripts. Unser Dank geht an Sébastien Oyou Kere und Williams Adienin für ihre Hilfe bei den Larvensammlungen. Wir danken Dobri Laurent Didier, Akoupo Alain Sylvain und dem verstorbenen Nestor Kesse für ihre technische Unterstützung im CSRS-Insektenhaus.

Dieses Projekt wurde vom Rahmenprogramm Horizon 2020 der Europäischen Union (Grant Agreement No. 688207-DMC-MALVEC) und dem Wellcome Trust [103995] finanziert.

Schweizerisches Zentrum für wissenschaftliche Forschung in der Elfenbeinküste, 01 BP 1303 Abidjan 01, Abidjan, Elfenbeinküste

Frankreich-Paraudie A. Kouadio, Behi K. Fodjo, Christabelle G. Sadia und Chouaïbou S. Mouhamadou

Nangui Abrogoua University, Abidjan, Elfenbeinküste

Frankreich-Paraudie A. Kouadio, Angele S. Nygble, Behi K. Fodjo und Christabelle G. Sadia

Schweizerisches Tropen- und Public Health-Institut, Kreuzstrasse 2, CH-4123, Allschwil, Schweiz

Frankreich-Paraudie A. Kouadio, Nadja C. Wipf & Pie Müller

University of Basel, Petersplatz 1, P.O. Box, CH-4001, Basel, Switzerland

Frankreich-Paraudie A. Kouadio, Nadja C. Wipf & Pie Müller

Institut für Molekularbiologie und Biotechnologie, Stiftung für Forschung und Technologie – Hellas, 70013, Heraklion, Griechenland

John Vontas und Konstantinos Mavridis

Pestizidwissenschaftliches Labor, Abteilung für Nutzpflanzenwissenschaften, Landwirtschaftliche Universität Athen, 11855, Athen, Griechenland

John Vontas

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CM und FP haben die Studie entworfen. CM, KM, PM und JV erhielten die Finanzierung. FP, BK, NW und CS sammelten Mückenlarven und züchteten sie im CSRS-Insektenhaus. FP und NW führten die DNA- und RNA-Extraktion durch und führten die Duplex- und Triplex-TaqMan-qPCRs durch, die von KM validiert wurden. NW und KM halfen bei der Visualisierung und Interpretation der qPCR-Daten. PM und FP führten statistische Analysen durch. CM und AN beaufsichtigten und leisteten Hilfe. FP hat den ersten Entwurf des Manuskripts geschrieben. BF, NW, PM, KM, JV und CM haben das Manuskript überprüft und bearbeitet. Alle Autoren haben die endgültige Fassung des Manuskripts gelesen und genehmigt.

Korrespondenz mit France-Paraudie A. Kouadio.

Unzutreffend.

Unzutreffend.

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden Interessen haben.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Kouadio, FP.A., Wipf, NC, Nygble, AS et al. Zusammenhang zwischen Insektizidresistenzprofilen bei Anopheles gambiae sensu lato und landwirtschaftlichen Praktiken in der Elfenbeinküste. Parasites Vectors 16, 270 (2023). https://doi.org/10.1186/s13071-023-05876-0

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Eingegangen: 09. Mai 2023

Angenommen: 06. Juli 2023

Veröffentlicht: 09. August 2023

DOI: https://doi.org/10.1186/s13071-023-05876-0

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